НТЦ АСХ специализируется на аутсорсинг-разработке ВЭЖХ методик фармацевтического анализа повышенной сложности. 

     К факторам, увеличивающим сложность ВЭЖХ определения, можно отнести:

​

- сложная матрица объекта (сиропы, гели, мази, свечи),

- большое число компонентов / примесей,

- методики для изучения стабильности (stability-indicating),

- низкая чувствительность определения целевых соединений,

- следовые количества примесей,

- хиральные ВЭЖХ разделения,

- методики для исследования фармакокинетики (PK/PD),

- протеомные, биофармацевстические разделения и т.д.

 

Наши ВЭЖХ методики базируются на трех основных принципах: специфичности, надежности и экономичности.

 

Эффективная ВЭЖХ методика не только обеспечивает требуемую точность измерения, но также ставит своим приоритетом высокую скорость анализа, отсутствие проблем при валидации и трансфере. Более того, она должна гарантировать сохранение высокой работоспособности всего комплекса ВЭЖХ колонка-хроматограф в течение длительного времени, без каких-либо сбоев в работе.

 

Для достижения этих целей мы используем трехэтапный подход к разработке методики. На первом этапе мы рассматриваем все возможные стратегии ВЭЖХ разделения, которые в принципе могут быть применимы для решения конкретной аналитической задаче. Наши выбранные решения приоритизируют минимальные негативные эффекты матрицы образца, сохранность применяемой ВЭЖХ колонки и высокую специфичность ВЭЖХ разделения и детектирования.

 

На втором этапе мы тщательно выбираем неподвижную фазу и тонко настраиваем состав подвижной фазы для достижения оптимальной селективности. Мы стараемся расположить сигналы целевых соединений на хроматограмме наиболее равномерным образом, так чтобы пары пиков с наименьшей селективностью находились в конце хроматограммы, а пары с наибольшей селективностью - в ее начале. Такая организация ВЭЖХ разделения не только способствует наиболее робастному разделению, но также повышает производительность методики и ее реальную рабочую специфичность на образцах с варьируемым составом матрицы.

 

На заключительном этапе мы тщательно оптимизируем технические параметры, такие как длина колонки, размер частиц адсорбента и скорость потока, чтобы достичь оптимального баланса между производительностью методики с одной стороны, и робастностью и специфичностью разделения с другой. Этот подход хорошо отработан на протяжении многих лет нашей работы, и позволяет получить на выходе высоконадежные, точные и экономически эффективные ВЭЖХ, которые превосходно справляются с рутинными измерениями.

 

Для обеспечения высочайшего стандарта в разработке ВЭЖХ методик мы используем разнообразие передовых ВЭЖХ колонок и наиболее современных аналитических техник, включая:

 

- различные ВЭЖХ режимы, как одиночные (RP, HILIC, IC, NP, CT, SEC), так и смешанные (RP/HILIC, RP/CT, RP/IC, HILIC/IC, NP/CT),

- различные методы детектирования, такие как UV/Vis, DAD, FLD, RID, ELSD, ECD,

- инновационные схемы с переключением потоков, такие как онлайн ТФЭ, "heart cutting" двумерную ВЭЖХ (2D-HPLC), схемы с эмуляцией градиентного режима и т.д.

 

Наш рабочий процесс обычно начинается с диагностики аналитической задачи, за которой следует разработка технической спецификации.

 

Такая спецификация определяет точные технические требования, необходимые для решения конкретной проблемы. На нашем опыте тщательно разработанная техническая спецификация играет ключевую роль в достижении успеха при разработке ВЭЖХ методики.

 

Как правило, техническая спецификация может устанавливать пороговые значения для различных характеристик разделения методом ВЭЖХ, которые могут быть критичны для какого-либо конкретного случая, например:

 

- разрешения критической пары,

- коэффициента асимметрии пика,

- эффективности,

- максимального времени анализа,

- максимального давления,

- минимального удерживания k’,

- предела определения (LOQ).

 

Опыт показывает, что нередко бывает практически невозможно разделить сложную смесь структурно схожих аналитов исключительно с помощью классической обращенно-фазовой ВЭЖХ. Мы имеем возможность применять на практике разнообразные ВЭЖХ режимы, как адсорбционные, так и эксклюзионные и смешанные режимы, такие как:

 

- обращенно-фазовый режим (RP).

- гидрофильный режим (HILIC).

- ионообменный (ионный) режим (IC).

- нормально-фазовый режим (NP).

- режим с переносом заряда (CT).

- режим эксклюзии по размеру (SEC/GPC).

- смешанные обращенно-фазовые режимы, такие как RP/IC, RP/HILIC, RP/CT,

- смешанные HILIC режимы: HILIC/IC, HILIC/IEX, HILIC/CT,

- смешанный NP/CT нормально-фазовый режим.

 

После разработки каждого метода ВЭЖХ мы проводим тщательную проверку специфичности и робастности определения. Эти процедуры верификации проводятся для каждого метода, разработанного нами, и протоколы верификации специфичности и робастности составляют неотъемлемую часть решения, предоставляемого нашим клиентам.