Рентабельность, простота, надежность – вот три принципа, которыми мы руководствуемся при разработке и модернизации ВЭЖХ методик. Хорошая методика должна быть производительной и незатратной, легко валидироваться и проходить трансфер, а также работать, работать и работать, без сбоев и нареканий.

​

Модернизация ВЭЖХ методики подразумевает улучшение ряда валидационных и эксплуатационных характеристик методики без перехода на иной ВЭЖХ режим, или принципиально иную ВЭЖХ колонку.

 

Основные направления модернизации ВЭЖХ методик:

 

- улучшение хроматографического разделения;

- уменьшение асимметрии хроматографических пиков;

- увеличение чувствительности определения;

- улучшение воспроизводимости (робастности) методики;

- сокращение времени анализа (увеличение производительности);

- увеличение срока эксплуатации ВЭЖХ колонки.

 

Кроме того, существуют еще два типа задач, с которыми приходится часто сталкиваться на практике при модернизации ВЭЖХ методик:

- перевод рутинных методик с градиентного на изократический режим элюирования;

- перевод методик с ион-парного режима элюирования на режим без применения ион-парного реагента.

Однако, настолько глубокая модернизация методики рассматривается как разработка новой методики взамен устаревшей.

 

Как правило, модернизация осуществляется путем изменения таких параметров, как:

 

- состав подвижной фазы;

- типоразмер ВЭЖХ колонки (длина колонки, диаметр колонки, зернение частиц адсорбента);

- марка хроматографической колонки;

- скорость потока,

- растворитель пробы, концентрация пробы, инжектируемый объем,

- условия детектирования, настройки детекторов.

 

В техническом задании на модернизацию ВЭЖХ методики можно указать требуемые значения для следующих параметров:

 

- минимально допустимое разрешение Rs критической пары, или критических пар;

- максимально допустимая асимметрия пика As;

- минимально допустимую эффективность N;

- максимально допустимое время анализа tR max;

- максимальные пределы определения и обнаружения LLOQ, LOD.

 

В том случае, когда модернизируется фармакопейное (EP, USP) или иное разделение, для которого существуют пределы изменения параметров разделения, границы изменения параметров также необходимо указать в техническом задании. Например, в европейской фармакопее длину колонки можно варьировать в рамках ± 70%, а в американской – только в рамках -25% и +50%, соответственно.

 

Модернизированное ВЭЖХ разделение включает поставку оформленного согласно международным рекомендациям текста методики, а также протоколы валидации специфичности и робастности разделения.