I.B.S. (EU) / ИП Сычев КС (сервисы) / АО Найтек Инстр. (оборудование) 

   База знаний по высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

Новую книгу компании Правильная эксплуатация ВЭЖХ оборудования и колонок (издательство Техносфера) можно приобрести в следующих магазинах >> 

  

Объявлена запись >> на ежегодный двухдневный сборный общий курс ВЭЖХ. Разработка ВЭЖХ методик. Экономика ВЭЖХ разделения. Место и дата проведения - Москва, 16-18 декабря.  

  

Открыта очередь на бесплатные пробные анализы смесей СО Заказчика >>  на поставляемых нами ВЭЖХ колонках

 
 

ГОСТ 34229-2017 Продукция соковая. Определение синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р 57990-2017 Продукция пищевая специализированная, биологически активные добавки к пище. Метод определения кверцетина.

ГОСТ 34151-2017 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 34138-2017 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания макроциклических лактонов с помощью ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием.

Гтоксина В1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р 51116-2017 Комбикорма, зерно и продукты его переработки. Определение содержания дезоксиниваленола методом ВЭЖХ.

ГОСТ ISO 17372-2016 Корма для животных. Определение содержания зеараленона методами иммуноаффинной колоночной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ ISO 14797-2016 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение содержания фуразолидона методом ВЭЖХ.

ГОСТ EN 15791-2015 Корма. Определение дезоксиниваленола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с очисткой на иммуноаффинной колонке.

ГОСТ 33428-2015 Корма, премиксы. Определение содержания лизина, метионина и треонина.

ГОСТ 32587-2013 Зерно и продукты его переработки, комбикорма. Определение охратоксина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 32251-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания афлатоксина В1.

ГОСТ 32201-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания триптофана.

ГОСТ 32195-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания аминокислот.

ГОСТ Р 54950-2012 Корма для животных. Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р 54949-2012 Корма для животных. Определение содержания витамина Е методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р 55448-2013 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение содержания охратоксина А методом ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием.

ГОСТ 32043-2012 Премиксы. Методы определения витаминов А, D, Е. (взамен ГОСТ Р 50928-96).

ГОСТ 32042-2012 Премиксы. Методы определения витаминов группы В. (взамен ГОСТ Р 50929-96).

ГОСТ 31691-2012 Зерно и продукты его переработки, комбикорма. Определение содержания зеараленона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (взамен ГОСТ Р 53093-2008).

ГОСТ 33809-2016 Мясо и мясные продукты. Определение сорбиновой и бензойной кислот методом ВЭЖХ.

ГОСТ 33808-2016 Мясо и мясные продукты. Определение лимонной кислоты методом ВЭЖХ.

ГОСТ 33780-2016 Продукты пищевые, корма, комбикорма. Определение содержания афлатоксина В1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением очистки на оксиде алюминия.

ГОСТ ISO 9167-1-2015 Рапс. Определение содержания глюкозинолатов. Часть 1. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 33680-2015 Продукты пищевые. Определение бенз(а)пирена в зерне, копченых мясных и рыбных продуктах методом ТСХ и ВЭЖХ.

ГОСТ 33504-2015 Добавки пищевые. Дигидрокверцетин. Технические условия.

ГОСТ 33460-2015 Продукция соковая. Определение ксилита, сорбита и маннита методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 33429-2015 Мясо и мясные продукты. Определение содержания молочной кислоты и лактатов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 33409-2015 Продукция алкогольная и соковая. Определение содержания углеводов и глицерина методом ВЭЖХ.

ГОСТ 33407-2015 Коньяки, дистилляты коньячные, бренди. Определение содержания фенольных и фурановых соединений методом высокоэффективной  жидкостной хроматографии.

ГОСТ 33406-2015 Продукция алкогольная, безалкогольная и соковая, добавки вкусоароматические. Определение содержания синтетических красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 33277-2015 Продукция соковая. Определение массовой концентрации каротиноидов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 33600-2015 Молоко и молочные продукты. Методика определения лактоферрина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 33332-2015 Продукты переработки фруктов и овощей. Определение массовой доли сорбиновой и бензойной кислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. (Взамен ГОСТ Р 52052-2003)

ГОСТ 33287-2015 Вино и виноматериалы. Определение содержания охратоксина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ ISO 15141-2-2013 Продукты пищевые. Определение содержания охратоксина А в зерне и зерновых продуктах. Часть 2. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с очисткой бикарбонатом.

ГОСТ ISO 14502-2-2015 Чай. Метод определения содержания катехинов.

ГОСТ ISO 7358-2015 Масла эфирные бергамотовое, лимонное, горького померанца и лайма, полностью или частично очищенные от бергаптена. Определение содержания бергаптена методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

ГОСТ ISO 16931-2014 Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания полимеризованных триацилглицеринов методом высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (ВЭЭХ).

ГОСТ 32916-2014 Молоко и молочная продукция. Определения массовой доли витамина D методом ВЭЖХ.

ГОСТ ISO 13493-2014 Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии. (Взамен ГОСТ ISO 13493-2005).

ГОСТ 32903-2014 Продукция соковая. Определение водорастворимых витаминов: тиамина (B1), рибофлавина (В2), пиридоксина (B6) и никотинамида (PP) методом обращенно-фазовой ВЭЖХ.

ГОСТ 32771-2014 Продукция соковая. Определение органических кислот методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. (Взамен ГОСТ Р 54684-2011)

ГОСТ 32712-2014 Продукция соковая. Определение фумаровой кислоты методом ВЭЖХ. (Взамен ГОСТ Р 54685-2011)

ГОСТ 32709-2014 Продукция соковая. Методы определения антоцианинов. (Взамен ГОСТ Р 53773-2010)

ГОСТ 32630-2014 Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Оценка коэффициента адсорбции почвой и осадками сточных вод методом ВЭЖХ.

ГОСТ EN 15891-2013 Продукты пищевые. Определение дезоксиниваленола в продовольственном зерне, продуктах его переработки и проуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и спектрофотометрического детектирования в ультрафиолетовой области спектра.

ГОСТ EN 15850-2013 Продукты пищевые. Определение зеараленона в продуктах для детского питания на кукурузной основе, ячменной, кукурузной и пшеничной муке, поленте и продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и флуориметрическим детектированием.

ГОСТ EN 15835-2013 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в продуктах на зерновой основе для питания грудных детей и детей раннего возраста. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и флуориметрического детектирования.

ГОСТ ISO 15141-2-2013 Продукты пищевые. Определение содержания охратоксина А в зерне и зерновых продуктах. Часть 2. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с очисткой бикарбонатом.

ГОСТ EN 14352-2013 Продукты пищевые. Определение фумонизинов B1 и B2 в продуктах на основе кукурузы. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта.

ГОСТ EN 13585-2013 Продукты пищевые. Определение фумонизинов В1 и В2 в кукурузе. Метод ВЭЖХ с применением очистки экстракта методом твердофазной экстракции.

ГОСТ ISO 10727-2013 Чай и чай растворимый. Определение содержания кофеина. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 32307-2013 Мясо и мясные продукты. Определение содержания жирорастворимых витаминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 32258-2013 Молоко и молочная продукция. Метод определения массовой доли бенз(а)пирена.

ГОСТ Р 55482-2013 Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания водорастворимых витаминов.

ГОСТ 32123-2013 Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания бенз(а)пирена. Метод с применением высокоразрешающей жидкостной хроматографии с обратной фазой.

ГОСТ 28038-2013 Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения микотоксина патулина.

ГОСТ ISO 20481-2013 Кофе и кофейные продукты. Определение содержания кофеина с использованием высокоэффективной жидкостной

хроматографии (HPLC). Стандартный метод. (Взамен ГОСТ Р 52613-2006)

ГОСТ Р 55339-2012 Продукция соковая. Определение анионов методом ионообменной хроматографии.

ГОСТ 31789-2012 Рыба, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Количественное определение содержания биогенных аминов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (взамен ГОСТ 53149-2008).

ГОСТ 31768-2012 Мед натуральный. Методы определения гидроксиметилфурфураля (взамен ГОСТ Р 52834-2007).

ГОСТ 31762-2012 Майонезы и соусы майонезные. Правила приемки и методы испытаний. (Взамен ГОСТ Р 53595-2009)

ГОСТ 31748-2012 Продукты пищевые. Определение афлатоксина B1 и общего содержания афлатоксинов B1, B2, G1 и G2 в зерновых культурах, орехах и продуктах их переработки. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (взамен ГОСТ Р 53162-2008).

ГОСТ 31745-2012 Продукты пищевые. Определение содержания полициклических ароматических углеводородов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. (Взамен ГОСТ Р 53152-2008)

ГОСТ 31669-2012 Продукция соковая. Определение сахарозы, глюкозы, фруктозы и сорбита методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. (Взамен ГОСТ Р 53766-2009)

ГОСТ 31644-2012 Продукция соковая. Определение 5-гидроксиметилфурфурола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. (Взамен ГОСТ Р 53694-2009)

ГОСТ 31643-2012 Продукция соковая. Определение аскорбиновой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 31504-2012 Молоко и молочная продукция. Определение содержания консервантов и красителей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. (Взамен ГОСТ Р 53752-2009)

ГОСТ Р ЕН 15829-2011 Продукты пищевые. Определение охратоксина А в коринке, изюме, кишмише, смесях сушеных фруктов и инжире сушеном. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и детектирования по флюоресценции.

ГОСТ Р 54760-2011   Продукты молочные составные и продукты детского питания на молочной основе. Определения массовой доли монои дисахаридов методом ВЭЖХ.

ГОСТ Р 54744-2011 Продукция соковая. Определение хинной, яблочной и лимонной кислот в продуктах из клюквы и яблок методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р 54742-2011 Продукция соковая. Определение нарингина и неогесперидина в апельсиновом соке методом ВЭЖХ.

ГОСТ Р 54637-2011 Продукты пищевые функциональные. Метод определения витамина D3.

ГОСТ Р 54635-2011 Продукты пищевые функциональные. Метод определения витамина А.

ГОСТ Р 54634-2011 Продукты пищевые функциональные. Метод определения витамина E.

ГОСТ Р ИСО 9233-2-2011 Сыры и плавленые сыры. Определение содержания натамицина. Часть 2. Метод ВЭЖХ.

ГОСТ Р ЕН 14130-2010 Продукты пищевые. Определение витамина С с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р ЕН 12857-2010 Продукты пищевые. Определение цикламата. Метод ВЭЖХ.

ГОСТ Р ЕН 12856-2010 Продукты пищевые. Определение ацесульфама калия, аспартама и сахарина. Метод ВЭЖХ.

ГОСТ Р 53883-2010 Мед. Метод определения сахаров. 

ГОСТ Р 53185-2008 Напитки безалкогольные и слабоалкогольные тонизирующие. Методы испытания.

ГОСТ 30711-2001 Продукты пищевые. Методы выявления и определения содержания афлатоксинов В1 и М1.

ГОСТ Р 51650-2000 Продукты пищевые. Методы определения массовой доли бенз(а)пирена.

ГОСТ Р 51435-99 Метод определения содержания микотоксина и патулина в соке яблочном, соке яблочном концентрированном и напитках, содержащих яблочный сок с помощью ВЭЖХ.

ГОСТ Р 51428-99 Соки фруктовые. Метод определения содержания винной кислоты с помощью ВЭЖХ.

ГОСТ Р 51427-99 Соки цитрусовые. Метод определения массовой концентрации гесперидина и нарингина с помощью ВЭЖХ.

ГОСТ 30059-93 Напитки безалкогольные. Методы определения аспартама, сахарина, кофеина и бензоата натрия. (Взамен ГОСТ Р 50502-93)

МУК 4.1.3274-15 Определение остаточных количеств азоксистробина и его основного Z-азоксистробина в зерне и масле кукурузы методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.3095-13 Определение остаточных количеств пикоксистробина в зеленой кукурузы, в семенах и масле подсолнечника, рапса и сои методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.2480-09 Определение остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах.

МУК 4.1.2229-07 Определение домоевой кислоты в морепродуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2.2204-07 Обнаружение, идентификация и количественное определение охратоксина А в продовольственном сырье и пищевых продуктах методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.2063-06 Методические указания по определению остаточных количеств триасульфурона в зерне хлебных злаков методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.2054-06 Методические указания по определению количеств Прохлораза в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.1962-05 Определение фумонизинов В(1) и В(2) в кукурузе (зерно, крупа, мука) методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.1456-03 Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств кломазона в воде, почве, зерне, соломе риса, семенах и масле сои хроматографическими методами.

МУК 4.1.1455-03 Методические указания по по определению остаточных количеств клефоксидима в воде, почве, зерне и соломе риса методом  высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.1454-03 Методы контроля, химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств имазамокса в воде, почве, зерне и масле сои методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.1442-03 Методические указания по определению ocтаточных количеств Флуметсулама и Флора-сулама в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.1437-03 Методические указания по определению остаточных количеств Тритосульфурона в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зерне и зеленой массе кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.1234-03 Определение остаточных количеств Фенамидона и его метаболитов (RPA 405862 и RPA 408056) в воде, почве, картофеле, томатах, луке и огурцах методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.1215-03 Определение остаточных количеств Амидосульфурона в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур, зерне и зеленой массе кукурузы методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.1213-03 Определение остаточных количеств Азоксистробина (ICI A 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воде, почве, в плодах огурцов, томатов, ягодах винограда, в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.1149-02 Определение остаточных количеств Цимоксанила в воде, почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, ягодах винограда, плодах огурца хроматографическими методами.

МУК 4.1.1148-02 Определение остаточных количеств Флудиоксонила в воде, почве, зеленой массе растений, клубнях картофеля, зерне и соломе хлебных злаков, зерне кукурузы, семенах и масле подсолнечника методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.1146-02 Определение остаточных количеств Фамоксадона в воде, почве, клубнях картофеля, зеленой массе, соломе и зерне зерновых колосовых культур методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.1144-02 Определение остаточных количеств Трифлусульфурон-метила в воде, почве, ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУК 4.1.1012-01 Определение массовой концентрации аверсектина С в органах и тканях животных, плазме и молоке методом флуоресцентной высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МВИ.МН 2146-2004 Методика определения фолиевой кислоты в обогащенных продуктах питания.

МВИ.МН 806-98 Методика определения концентраций сорбиновой и бензойной кислот в пищевых продуктах методом ВЭЖХ.

МУ 6129-91 Методические указания по групповой идентификации хлорорганических пестицидов и их метаболитов в биоматериале, продуктах питания и объектах окружающей 

среды методом адсорбционной высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУ 5018-89 Методические указания по определению остатков глина (хлорсульфурона) в зерне и соломе зерновых колосовых культур, в семенах и полове льна-долгунца методом ВЭЖХ.

МУ 4082-86 Методика определения афлатоксинов в пищевых продуктах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МУ 4072-86 Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания мочевой кислоты в зерне и зернопродуктах.

МУ 3184-84 Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье.

 

Объекты анализа сельскохозяйственной продукции (корма, комбикорма)

 

ГОСТ 34439-2018 Средства лекарственные для ветеринарного применения, корма, кормовые добавки. Определение содержания антиоксидантов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии со спектрофотометрическим детектированием.

ГОСТ 34258-2017 Средства лекарственные для ветеринарного применения, кормовые добавки. Метод определения содержания водорастворимых витаминов с помощью ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием.

ГОСТ ISO 14718-2017 Корма, комбикорма. Определение содержания афлатоксина В1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р 51116-2017 Комбикорма, зерно и продукты его переработки. Определение содержания дезоксиниваленола методом ВЭЖХ.

ГОСТ ISO 17372-2016 Корма для животных. Определение содержания зеараленона методами иммуноаффинной колоночной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ ISO 14797-2016 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение содержания фуразолидона методом ВЭЖХ.

ГОСТ EN 15791-2015 Корма. Определение дезоксиниваленола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с очисткой на иммуноаффинной колонке.

ГОСТ 33428-2015 Корма, премиксы. Определение содержания лизина, метионина и треонина.

ГОСТ 32587-2013 Зерно и продукты его переработки, комбикорма. Определение охратоксина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 32251-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания афлатоксина В1.

ГОСТ 32201-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания триптофана.

ГОСТ 32195-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания аминокислот.

ГОСТ Р 54950-2012 Корма для животных. Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р 54949-2012 Корма для животных. Определение содержания витамина Е методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р 55448-2013 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение содержания охратоксина А методом ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием.

ГОСТ 32043-2012 Премиксы. Методы определения витаминов А, D, Е. (взамен ГОСТ Р 50928-96).

ГОСТ 32042-2012 Премиксы. Методы определения витаминов группы В. (взамен ГОСТ Р 50929-96).

ГОСТ 31691-2012 Зерно и продукты его переработки, комбикорма. Определение содержания зеараленона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (взамен ГОСТ Р 53093-2008).

ГОСТ Р 51116-97 Комбикорма, зерно, продукты его переработки. Метод определения содержания дезоксиниваленола (вомитоксина).

ГОСТ 30087-93 Дрожжи кормовые-паприн. Методы определения 3,4-бензпирена.

ГОСТ 26573.1-93 Премиксы. Методы определения витамина А.

Р 4.1.1672-03 Руководство по методам контроля качества и безопасности БАД к пище.

МУК 4.1.1912-2004 Определение остаточных количеств левомицетина (хлорамфеникола, хлормецитина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа.

М-02-902-142-07 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методика выполнения измерений массовой доли аминокислот методом ВЭЖХ.

М-02-902-146-08 Биологически активные добавки, премиксы, корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методика выполнения измерений массовой доли водорастворимых кислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

М-02-1006-08 Биологически активные добавки, премиксы, корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методика выполнения измерений массовой доли жирорастворимых кислот методом ВЭЖХ.

МУ 5177-90 Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) и зеараленона в зерне и зернопродуктах.

ГОСТ Р 52147-2003 Белково-витаминно-минеральные и амидо-витаминноминеральные добавки. Методы определения содержания ретинола-ацетата (витамина А), эргокальциферола (холекальциферола) (витамина D), токоферола-ацетата (витамина Е).

 

Качество воздуха рабочей зоны

 

ГОСТ Р ИСО 14382-2015 Воздух рабочей зоны. Определение паров толуолдиизоцианата

с применением фильтров из стекловолокна, пропитанных 1-(2- пиридил)-пиперазином и анализ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым и флуоресцентным детекторами.

ГОСТ 32534-2013 Дифенилолпропан. Определение содержания в воздушной среде.

ГОСТ Р ИСО 17736-2013 Воздух рабочей зоны. Определение изоцианатов в воздухе с применением устройства отбора проб с двумя фильтрами и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р ИСО 17735-2012 Воздух рабочей зоны. Определение суммарного содержания изоцианатных групп в воздухе методом жидкостной хроматографии с использованием в качестве реагента 1-(9-антраценилметил)пиперазина (МАР).

ГОСТ Р ИСО 21438-3-2012 Воздух рабочей зоны. Определение неорганических кислот методом ионной хроматографии. Часть 3. Фтороводородная кислота и твердые фториды.

ГОСТ Р ИСО 21438-2-2012 Воздух рабочей зоны. Определение неорганических кислот методом ионной хроматографии. Часть 2. Летучие кислоты, кроме фтороводородной (хлороводородная, бромоводородная и азотная).

ГОСТ Р ИСО 21438-1-2011 Воздух рабочей зоны. Определение неорганических кислот методом ионной хроматографии. Часть 1. Нелетучие кислоты (серная и фосфорная).

ГОСТ Р ИСО 16702-2008 Качество воздуха рабочей зоны. Определение общего содержания изоцианатных групп органических соединений в воздухе методом жидкостной хроматографии с использованием 1-(2-метоксифенил)пиперазина.

МУК 4.1.1045-01 ВЭЖХ определение формальдегида и предельных альдегидов (С2-С10) в воздухе.

МУК 4.1.1045А-01 ВЭЖХ определение диоксацина в воздухе.

МУК 4.1.0.416-96 Измерение концентраций витамина B1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в воздухе рабочей зоны.

МУК 4.1.0.398-96 Измерение концентраций фенигидина(2,6-диметил-3,5-диметоксикарбонил-4-(0-нитрофенил)-1,4-дигидропиридин) методом ВЭЖХ в воздухе рабочей зоны.

МУК 4.1.0.397-96 Измерение концентраций 3-три-фторметилацетанилида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны.

МУК 4.1.258-96 Измерение концентраций триметилсульфония бромистого методом ВЭЖХ в воздухе рабочей зоны.

МУК 4.1.243-96 Определение концентрации метиоприола в воздухе рабочей зоны методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.226-96 Измерение концентраций 3,5-дихлорсульфаниламида методом ВЭЖХ в воздухе рабочей зоны.

 

Объекты анализа окружающей среды

 

М-02-902-143-07 Снежный покров. Методика выполнения измерений массовой доли бенз(а)пирена методом ВЭЖХ.

МУК 4.1.1274-03 Измерение массовой доли бенз(а)пирена в пробах почв, грунтов, донных отложений и твердых отходов методом ВЭЖХ с использованием флуориметрического детектора.

 

Анализ нефтепродуктов и топлива

 

ГОСТ 33912-2016 Топливо авиационное и нефтяные дистилляты. Определение типов ароматических углеводородов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с рефрактометрическим детектором.

ГОСТ 33306-2015 Этанол топливный. Определение содержания фактических и потенциальных неорганических сульфатов и неорганических хлоридов методом ионной хроматографии с прямым вводом образца и подавлением.

ГОСТ IEC 61198-2014 Масла изоляционные нефтяные. Методы определения 2-фурфурола и родственных соединений.

ГОСТ IEC 60666-2014 Масла изоляционные нефтяные. Обнаружение и определение установленных присадок.

ГОСТ Р МЭК 61198-2013 Масла изоляционные нефтяные. Методы определения 2-фурфурола и родственных соединений.

ГОСТ Р 55112-2012 Биотопливо твердое. Определение содержания водорастворимых хлорида, натрия и калия.

ГОСТ Р 54268-2010 Топлива авиационные и нефтяные дистилляты. Определение типов ароматических углеводородов методом ВЭЖХ с детектированием по коэффициенту рефракции.

ГОСТ Р ЕН 12916-2008 Нефтепродукты. Определение типов ароматических углеводородов в средних дистиллятах. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с детектированием по коэффициенту рефракции.

ВЭЖХ системы с переключением потоков. Двумерная ВЭЖХ

Многомерная техника ВЭЖХ эксперимента в настоящее время, по сути, только начинает развиваться – в отличие от подобной техники в газовой хроматографии, в которой многомерные (multidimensional) методы давно нашли свои приложения.
Идея многомерного (в самом простом случае – двумерного, 2D) метода состоит в последовательном разделении пробы на нескольких хроматографических колонках. В данной главе мы рассмотрим только двумерные методы.
        В жидкостной хроматографии применение многомерного разделения может преследовать по крайней мере три цели:
- последовательное проведение высокоэффективной очистки пробы и хроматографического разделения;
- эмуляция градиентного элюирования при помощи многомерного изократического элюирования;
- многократное увеличение разрешающей способности (пиковой плотности) хроматографического разделения за счет его многомерности.
       Чтобы избежать путаницы в терминологии, все хроматографические системы подобного рода будем называть ВЭЖХ системами с переключением колонок. Многомерной (двумерной) ВЭЖХ будем называть только системы последнего типа, т.е. целью которых является многократное увеличение пиковой плотности хроматограммы за счет ее многомерности. Рассмотрим каждый из типов систем с переключением колонок более подробно.


Эмуляция градиентного элюирования при помощи многомерного изократического элюирования. Это наиболее экзотический и не очень часто применяемый многомерный метод, рассмотрение которого, тем не менее, позволит наиболее быстро освоить логику конструирования систем с переключением колонок.
   Схема наиболее общей системы такого типа приведена на рисунке 1. После системы инжектирования устанавливают переключающий кран, на котором монтируют две хроматографические колонки. Обе колонки работают в одном режиме и на одном элюенте. Детектора два: первый на выходе первой колонки, второй – на выходе второй колонки.

Рисунок 1. Схема-эмулятор1

Рисунок 2. Схема-эмулятор2

Рисунок 3. Схема с ТФЭ

После поворота крана инжектора проба попадает на первую колонку. Слабо удерживаемые соединения проскакивают на вторую колонку, после чего поворачивают переключающий кран. Удовлетворительно удерживаемые соединения разделяются на первой колонке и определяются первым детектором. В это же время соединения, проскочившие на вторую колонку, за счет большего на ней удерживания также разделяются, а затем определяются вторым детектором.
     Для того, чтобы подобная система работала по описанной схеме, необходимо правильно подобрать тип и типоразмер обеих колонок. Здесь возможны два варианта. Первый вариант: обе колонки заполнены одним и тем же адсорбентом. В этом случае первая колонка должна быть значительно короче второй (например, 50 мм и 250 мм). Второй вариант: применяют колонки одинакового типоразмера (соответственно, одинаковой длины). В этом случае адсорбент второй колонки должен опеспечивать большее удерживание. В обращенно-фазовом режиме на место первой колонки можно установить С18 фазу с меньшей долей углерода (наример, 12%), а на место второй – С18 фазу с большей долей углерода (например, 17%).
   Данную схему можно упростить, оставив только один детектор (см. рис. 2). Плата за упрощение системы – необходимость с филигранной точностью синхронизировать времена элюирования компонентов с первой и второй колонки, чтобы они могли определяться одним детектором.

   Система работает следующим образом. После поворота крана инжектора проба попадает на первую колонку. Слабо удерживаемые соединения проскакивают на вторую колонку, после чего поворачивают переключающий кран. Удовлетворительно удерживаемые соединения продолжают разделяться на первой колонке, в то время как проскочившие соединения разделяются на второй. После разделения на второй колонке разделенные компоненты попадают обратно в первую колонку, где они практически не удерживаются и начинают догонять компоненты, разделяемые первой колонкой. При верной синхронизации все компоненты могут быть определены одним детектором.
   Схема может показаться слишком вычурной для аналитической хроматографии, но она показывает хорошие результаты при препаративных разделениях, например, при высокоэффективной очистке дорогих фармацевтических субстанций.
   Следует отметить, что описанные системы с переключением колонок можно назвать многомерными лишь условно, поскольку разделение на обеих колонках происходит в одном и том же хроматографическом режиме, т.е. формально в одном измерении.

 


ВЭЖХ системы для последовательного проведения высокоэффективной очистки пробы и хроматографического разделения.

 

Наиболее простой системой такого рода является ВЭЖХ с он-лайн твердофазной экстракцей, он-лайн ТФЭ.

   После системы инжектирования устанавливают переключающий кран, на котором монтируют адсорбционный картридж (или очень короткую колонку, например, предколонку длиной 10-20 мм), а также (в другую позицию крана) основную хроматографическую колонку. Инжектор соединяют с насосом, подающим промывочную жидкость для картриджа. Позицию крана, в которую установлена хроматографическая колонка, соединяют со вторым насосом, который подает элюент.
   После поворота крана инжектора проба в потоке промывочной жидкости попадает на ТФЭ картридж; целевые соединения удерживаются на картридже, а сопутствующие соединения вымываются из него промывочной жидкостью. Через некторое время поворачивают переключающий кран. В картридж поступает элюент. Целевые вещества, смытые с картриджа, в потоке элюента попадают в хроматографическую колонку (см.рис. 3).

   Такая система позволяет провести предварительную очистку пробы перед ее инжектированием на основную хроматографическую колонку. Прежде всего, ее применяют для удаления из пробы высокомолекулярных компонентов матрицы, мешающих определению (например, белков). В этом случае картридж заполняют т.н. ОДП материалами, материалами с ограниченно доступной поверхностью (RAM, restricted access material). Эти адсорбенты обеспечивают разделение в смешанном адсорбционном/эксклюзионном режиме, удерживая целевые соединения по адсорбционному механизму и удаляя высокомолекулярные соединения по эксклюзионному механизму.
   Традиционно системы с он-лайн ТФЭ применяют в обращенно-фазовом режиме, но их можно вполне успешно применять практически во всех адсорбционных режимах.
   Ключевая схема одновременной высокоэффективной очистки и хроматографического определения называется хроматографической лупой (heart cutting). После системы инжектирования устанавливают первую (высокоэффективную) колонку – именно на ней происходит высокоэффективное фракционирование пробы. Выход первой колонки соединяют с переключающим краном. На переключающий кран монтируют вторую хроматографическую колонку, а в другую позицию крана – петлю определенного объема или концентрирующий картридж. Адсорбционный материал картриджа по своей химии должен соответствовать материалу второй колонки. Инжектор соединяют с насосом, подающим элюент для первой колонки. Переключающий кран соединяют с насосом, подающим элюент для первой колонки (см. рис. 4).

Рисунок 4. Схема "хроматографической лупы"

После поворота крана инжектора проба разделяется на первой колонке. В момент начала элюирования фракции целевых веществ поворачивают переключающий кран. Если на кране установлен ТФЭ картридж, то в момент конца элюирования фракции целевых веществ переключающий кран поворачивают обратно. Если на кране установлена петля, то переключающий кран поворачивают обратно в момент заполнения петли; объем петли следует подобрать так, чтобы в нее вмещался бы весь объем фракции целевых веществ.
       Таким образом, на вторую колонку попадает только достаточно узкая фракция пробы, которая содержит целевые вещества.
Схема хроматографической лупы отличается от схемы с он-лайн ТФЭ (и тем более от схем-эмуляторов градиентного разделения) одной ключевой особенностью: эту схему бессмысленно применять, имея две колонки с одинаковой селективностью. При равной селективности смысл в применении двух колонок потеряется – для разделения будет достаточно одной колонки, наиболее эффективной из двух.
   Таким образом, именно на схеме хроматографической лупы становится понятен смысл многомерности разделения: под измерением здесь подразумевается не колонка как таковая, а та или иная уникальная селективность разделения. В пределе, наибольшей эффективности приведенная схема достигает в условиях работы в двух различных хроматографических режимах.
     Чисто технические сложности, к сожалению, позволяют сопрягать в одной системе не любые пары хроматографических режимов (десять пар) в любых последовательностях (двадцать вариантов), а только некоторые из них. Эти сложности можно преодолеть, только усложнив конструктивную схему системы. Технические ограничения таковы:
- первый и второй элюенты должны быть взаимно растворимы;
- первый элюент должен обладать низкой элюирующей силой для второй хроматографической колонки.
    В первом приближении, можно назвать пять вариантов сочетания режимов для водных элюентов (первым приводится режим работы первой колонки):
- эксклюзионный (водн.), обращенно-фазовый;
- эксклюзионный (водн.), ионный;
- ионный, обращенно-фазовый;
- обращенно-фазовый, ионный;
- гидрофильная хроматография, ионный.
     Подобным образом, можно назвать всего два варианта для элюентов на основе гексана:
- с переносом заряда, нормально-фазовый;
- нормально-фазовый, с переносом заряда.
     Приведенные сочетания режимов, как правило, возможно реализовать с помощью схемы хроматографической лупы напрямую, без необходимости применения каких-либо вспомогательных технических решений.
    К сожалению, без них нельзя обойтись при сопряжении обращенно-фазового режима и гидрофильной хроматографии. В этом случае на переключающем кране обязательно должен быть установлен картридж – причем со специально подобранным адсорбентом, гидрофобность которого значительно выше таковой для обращенно-фазового адсорбента первой колонки. Например, в качестве первой колонки можно установить С18 фазу с пониженной долей углерода (8-12%), а картридж заполнить нейтральным полистирол-дивинилбензолом высокой сшивки.

ВЭЖХ системы для многократного увеличения разрешающей способности (пиковой плотности) хроматографического разделения за счет его многомерности. По сути, именно такие системы можно с полным правом назвать многомерными.
В двумерных систмах узкие фракции элюата с первой колонки непрерывно, друг за другом, поступают на вторую колонку. Вторая колонка, как правило, является короткой, т.е. обеспечивает быстрое разделение "во втором измерении" за то время, которое необходимо для отбора очередной фракции с первой колонки.
    Если время хроматографического разделения на второй колонке превышает время отбора очередной фракции, то вторых колонок (одинаковых) необходимо несколько штук. Прибор должен автоматически:
- перераспределять фракции на свободные откондиционированные колонки,
- кондиционировать колонки, отработавшие цикл,
- получать данные с колонок, на которых происходит разделение и т.д.
     Подобная ВЭЖХ система, соответственно, должна управляться специализированным программным обеспечением. Кроме того, ПО для обработки данных также должно быть специализированным, и позволять работать с двумерными пиками (при многоканальном детектировании – трехмерными). Таким образом, систему двумерной ВЭЖХ нельзя просто собрать из различных стандартных блоков, как любую иную систему с переключением колонок. Это отдельный инструмент, который выспускают компании-производители аналитического оборудования.
   Все хроматографические особенности сочетания режимов, присущих схеме хроматографической лупы, в полной мере справедливы и для двумерной хроматографии. Режимы "ионный + обращенно-фазовый" и "эксклюзионный + обращенно-фазовый", к примеру, применяют в протеомных исследованиях. В первом случае ионная колонка может быть капиллярной – удобно и с позиции малого потребления пробы (в протеомике это важно), и с позиции малого объема фракции, наносимой на вторую колонку.     Вместо того, чтобы применять ВЭЖХ разделение на первой колонке, хроматограф вообще можно состыковать с системой капиллярного электрофореза. Режимы "нормально-фазовый + с переносом заряда" и "обращенно-фазовый + с переносом заряда" (при неоходимости можно осуществить и это сочетание) применяют для разделения сложных смесей триглицеридов, иных липидов, углеводородов.
     В любом случае, двумерная хроматография – это метод решения достаточно сложных исследовательских задач. Для рутинных анализов предназначены системы с он-лайн ТФЭ и системы хроматографической лупы.

 

Закупка ВЭЖХ оборудования и ВЭЖХ колонок

 

Закупка прибора должна начинаться с ответов на три простые вопроса:
- зачем покупается прибор?
- имеет ли персонал достаточную квалификацию для проведения анализа с его помощью?
- обладает ли лаборатория необходимым минимумом общелабораторного оборудования?

     Прибор может покупаться по разным причинам, главное – правильно эти причины сформулировать и не скрывать от человека, ответственного за закупку.

    Хроматограф можно приобретать для решения текущих задач – в этом случае необходимо их перечислить, установить весь перечень предъявляемых к прибору требований. Хроматограф можно приобретать для вложения текущих средств, исходя из расчета, что он может понадобиться для решения тех или иных задач в будущем. Можно вкладывать деньги в прибор, даже не очень хорошо понимая, какие анализы будут выполняться с его помощью – только не надо этого скрывать. Под известный бюджет всегда можно сформировать комплект оборудования, пригодный для решения наиболее типовых задач.

     Прибор сам ничего анализировать не будет; анализ выполняет химик, оператор прибора – с помощью прибора. Перед покупкой прибора необходимо совершенно однозначно понять, имеет ли персонал достаточную квалификацию для проведения анализа с его помощью? И "нет" здесь может являться совершенно нормальным ответом. Опять же, этого не следует скрывать – все тайное быстро становится явным, и тогда без громких скандалов и разбирательств (при стоящей на месте работе) будет не избежать. Хороший персонал нужно лелеять, мотивировать и обучать. При необходимости, проведение дополнительных курсов обучения можно включать в комплект поставки прибора. Это ни в коем случае не противоречит закону о госзакупках (если оборудование покупает государственное предприятие).

    При покупке хроматографа начинающим пользователям стоит задуматься, обладает ли лаборатория необходимым минимумом общелабораторного оборудования? Особенно важен этот вопрос в том случае, когда анализ включает в себя пробоподготовку, даже минимальную. Типовое оборудование, без которого не обойтись ни в каком случае, включает:

- аналитические весы с широким диапазоном, невысокого класса точности (для взвешивания реагентов и навесок образцов);
- аналитические весы высокого класса точности (для взвешивания стандартных веществ);
- автоматические пипетки;
- рН-метр;
- стеклянные цилиндры, стаканчики и пробники;
- вакуумная линия (например, водоструйный насос);
- блендер (при необходимости);
- настольная центрифуга (желательно);
- ультразвуковая ванна (желательно).

   На втором этапе можно переходить, собственно, к конструированию прибора. Как правило, вопросов о детекторе (или детекторах) не возникает – их выбор однозначно определяется поставленными аналитическими задачами и размером бюджета. Вне контекста также теряет смысл дискуссия о преимуществах и недостатках систем открытого и закрытого типов.

     Для начала, при покупке надо избежать наиболее распространенной ошибки: покупки большого числа дорогих детекторов, а к ним (по остаточному принципу) – одного насоса. Существует заблуждение, что таким образом покупается прибор, способный выполнять все поставленные (множественные) аналитические задачи. На практике оказывается, что работает прибор с одним детектором (как правило, самым дешевым УФ спектрофотометром), а остальные запредельной цены блоки загромождают стол, мешая работе, и в лучшем случае служат мебелью. Давайте будем реалистами: один насос – один детектор – один компьютер с управляющей программой.

    Если прибор покупается на госзакупках, и под него выделяется бюджет, достаточный для покупки нескольких приборов – в жидкостной хроматографии проблем с этим нет. Поскольку принцип строения приборов – блочно-модульный, не составляет труда набрать необходимое число блоков, и назвать все одним хроматографом. Допустим, как вариант, хроматографом для многомерного разделения (из нескольких насосов, детекторов и управляющих программ).

      Если прибор покупают для количественных определений на потоке, т.е. подразумевается, что он будет штамповать анализы как автомат, ошибкой будет экономить на автосамплере с автоматической промывкой инжектора. Экономия на автосамплере-автомате обернется затратами на человека-автосамплера.

   Обязательно надо включать в комплект термостат колонок. Можно сэкономить, взяв вместо термостата с принудительным нагнетанием значительно более дешевый контактный – но термостат должен быть в комплекте.

     Теперь рассмотрим вопрос выбора насосной системы. На данный момент коммерчески доступны системы с пределом давления 400 атм, 600 атм, а также системы сверхвысокого давления с пределом 1000-1500 атм. Их относительную стоимость можно оценить как 1:1.2:2, т.е. 600 атм системы немного дороже 400 атм, а системы сверхвысокого давления дороже примерно вдвое.

     Вообще говоря, с технической точки зрения разница между пределом в 400 и 600 атмосфер достаточно велика; на системах первого типа обычно работают в пределах 250-300 атм, а на системах второго типа – до 450 атм (около 7000 psi, на которые рассчитаны стандартные инжекторы). При этом очень важно, что стоимость эксплуатации систем одинакова. В этом смысле 600 атм насосы выглядят более привлекательно, чем 400 атм, поскольку обеспечивают в полтора раза большую производительность при лишь немногим большей цене.

      Насосы сверхвысокого давления занимают свою нишу; они нужны там, требуется максимальная производительность анализов – пусть даже ценой повышенных эксплуатационных затрат. Их ставят на прибор, который работает на потоке: по одной программе, на одной колонке – выполняя один заданный анализ с максимальной скоростью. Соответственно, приборы с насосом сверхвыского давления бессмысленно комплектовать ручным инжектором – здесь однозначно необходим автосамплер.

     Вопрос выбора между изократической системой, градиентной со смешиванием на стороне низкого давления и градиентной со смешиванием на стороне высокого давления – это, к сожалению, вопрос довольно творческий, и здесь сложно что-либо рекомендовать однозначно.

     В целом, если бюджет позволяет, лучше приобретать полноценную систему из двух насосов высокого давления. Для начала, только такая системы может обеспечить быстрые градиенты за несколько минут. Правда, доля градиентных разделений не столь высока, и это серьезный довод. Тем не менее, большую роль на практике начинает играть само по себе наличие второго насоса как важного вспомогательного средства:

- поломка одного насоса не приведет к остановке работы (в строй встанет второй насос);
- в изократическом режиме второй насос обеспечит быструю промывку колонки после анализа;
- второй насос при необходимости обеспечит проведение градиентного элюирования;
- второй насос можно применять для офф-лайн промывки колонок и предколонок;
- прибор с градиентом на стороне высокого давления и двумя детекторами – это, фактически, два прибора;
- добавлением крана из прибора с градиентом на стороне высокого давления можно сконструировать систему с переключением колонок (в т.ч. систему с он-лайн ТФЭ).

   Переходим к комплектации хроматографа. Это очень больная тема; не все могут спокойно воспринять мысль о том, что нормальная цена комплектации прибора составляет примерно треть его стоимости. Это не выдумка, а суровая реальность: при меньших затратах на комплектацию применение хроматографа будет попросту неэффективным.

     "Правило трети" вообще хорошо выполняется для любого оборудования, а в жидкостной хроматографии оно выполняется тем более. Специфика ВЭЖХ заключается в том, что анализ осуществляет не прибор, а небольшая деталь стоимостью 1% от стоимости прибора – хроматографическая колонка. Прибор стоимостью 99% лишь обеспечивает возможность проведения анализа.

     Поскольку успешность проведения анализа определяется колонкой – а это расходная часть – то колонок в комплекте должно быть много, и разного типа. Разумная часть от стоимости прибора, которую можно отвести под закупку колонок – 10-15%. Таким образом, это около десяти колонок. Десять процентов стоимости получается в том случае, когда все колонки аналитические (диаметр составляет 4.6 мм и менее), и имеют силикагельную основу. Пятнадцать процентов – если в комплекте есть более дорогие колонки: эксклюзионные, ионные, хиральные, полупрепаративные.

    Вот очень приблизительный список колонок первой необходимости, которые необходимо всегда держать под рукой (не надо также забывать про предколонки):

- С18 фаза, подходящая для разделения органических оснований, 250х4 или 250х4.6, 5 мкм: 2 шт.;
- С18 фаза, подходящая для разделения органических оснований, 100х4 или 100х4.6, 3 мкм: 2 шт.;
- С18 фаза, подходящая для работы в 100% водных средах, 250х4 или 250х4.6, 5 мкм: 1 шт.;
- С18 фаза, подходящая для работы в 100% водных средах, 100х4 или 100х4.6, 3 мкм: 1 шт.;
- С16-амидная фаза, 250х4 или 250х4.6, 5 мкм: 1 шт.;
- пентафторфенильная фаза, 250х4 или 250х4.6, 5 мкм: 1 шт.;
- амино-фаза, 250х4 или 250х4.6, 5 мкм или 3 мкм: 2 шт.;
- силикагельная фаза, 250х4 или 250х4.6, 5 мкм или 3 мкм: 1 шт.;
- SCX (катионит) на основе силикагеля, 250х4 или 250х4.6, 5 мкм или 3 мкм: 1 шт.

      В комплект также желательно включать:

- по 5 метров капилляров (например, по 500 мм) внутреннего диаметра 150 мкм и 300мкм; 10-20 монолитных фитингов или 6-10 с металлическим винтом и двуконусной ферулой;
- несколько запасных линий для забора элюента;
- специальные инструменты (ключи стандартные металлические, резак капилляров, резак стальных трубок, ключи специальные: втульчатые, для фитингов с ручным уплотнением и т.д.);
- комплект для фильтрации и дегазации элюентов;
- дополнительная полумикро- или микрокювета (для работы с короткими аналитическими или микроколонками);
- запасные клапаны насосов (при необходимости – головку насоса); запасные уплотнения плунжеров;
- запасные лампы для детекторов;
- запасной ручной инжектор.

Стандартные и опциональные процедуры квалификации (OQ/PQ) жидкостных хроматографов (ВЭЖХ систем) 

Операционная квалификация (Operational Qualification): стандарт/опция

 

Насосная система

1. Точность задания скорости потока (на одной скорости / трех скоростях потока)

2. Стабильность потока (по временам удерживания, на одной скорости / трех скоростях потока)

3. Линейность скорости потока

 

В т.ч. градиентная насосная система (если есть в наличии)

4. Точность задания градиента (один шаг / различные шаги)

5. Время задержки градиента

6. Повторяемость времени элюирования в градиентном режиме

 

Детектор УФ 

7. Точность установки длины волны (диодно-матричный / одно- или мультиканальный)

8. Шум

9. Дрейф

10. Предел определения

11. Линейность

 

Инжектор автоматический 

12. Повторяемость инжектирования

13. Точность инжектирования

14. Линейность инжектирования

15. Керри-овер (стандартное вещество и стандартная промывка / нестандартное вещество и нестандартная промывка)

 

Инжектор ручной 

12. Повторяемость инжектирования

13. Точность инжектирования

14. Линейность инжектирования

15. Керри-овер (стандартное вещество и стандартная промывка / нестандартное вещество и нестандартная промывка) 

 

Жидкостная система 

16. Качество сборки жидкостной системы

 

Термостат колонки 

17. Точность установки температуры (по центру / в трех точках)

18. Стабильность поддержания температуры

 

Термостат автосамплера 

19. Точность установки температуры, нагревание

20. Точность установки температуры, охлаждение

 

 

Performance Qualification: стандарт/опция

 

Тестирование протокола обработки данных (ПО) 

1. Проверка способа расчета разрешения

2. Проверка способа расчета асимметрии

3. Проверка способа расчета эффективности

4. Проверка способа расчета отношения сигнал/шум в стандартных / нестандартных условиях хроматографирования

 

Тестирование обращенно-фазовых ВЭЖХ колонок 

1. Стандартный тест на эффективность (качество упаковки)

2. Измерение относительной величины гидрофобности

3. Установление типа химии обращенной фазы по двухпараметровому тесту селективности

4. Установление относительной величины химической инертности

 

Тестирование ВЭЖХ колонок для гидрофильной/ионной хроматографии на основе силикагеля 

1. Стандартный тест на эффективность в нормально-фазовом режиме (качество упаковки)

2. Перевод ВЭЖХ колонки в гидрофильный/ионный режим хроматографии

3. Измерение относительной величины гидрофильности (удерживания в гидрофильном режиме)

4. Установление знака и относительной величины электрического заряда неподвижной фазы

5. Тест на эффективность в гидрофильном режиме

6. Тест на эффективность анионита в ионном режиме

7. Тест на эффективность катионита в ионном режиме

 

Список ВЭЖХ методик по ГОСТ, реализуемых на наших ВЭЖХ комплексах

Анализ пищевых продуктов

 

ГОСТ 34461-2018 Продукция соковая. Определение содержания гесперидина и нарингина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ ISO 20634-2018 Смеси адаптированные для искусственного вскармливания детей раннего возраста и смеси для энтерального питания взрослых. Определение витамина В12 методом обращеннофазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ ISO 20633-2018 Смеси адаптированные для искусственного вскармливания детей раннего возраста и смеси для энтерального питания взрослых. Определение содержания витамина Е и витамина А с помощью нормально-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 34456-2018 Молоко и продукция молочная. Определение состава стеринов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 34448-2018 Мясо и мясные продукты. Методы определения L-(+)-глутаминовой кислоты.

ГОСТ 34228-2017 Продукция соковая. Определение консервантов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ 34230-2017 Продукция соковая. Определение свободных аминокислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

 

Словарь ВЭЖХ терминов и сокращений

 

НФ – stationary phase, неподвижная фаза: конкретный тип пористого (в т.ч. адсорбционного) материала, которым заполнена колонка.
    Материал, применяемый для разделения, называют «неподвижной фазой» в наиболее общем смысле. Термин «адсорбент» менее универсален: неподвижная хроматографическая фаза не обязательно должна проявлять адсорбционные совйства (см. «Эксклюзионные режимы»).


ПФ – mobile phase, подвижная фаза: элюент. Эти два термина эквивалентны.

Типоразмер – column dimention, габариты хроматографической колонки: длина, внутренний диаметр, а также зернение частиц применяемого адсорбента.

Удерживание (строго говоря, фактор удерживания) – retention (retention factor), параметр в адсорбционных хроматографических режимах, характеризующий величину взаимодействия вещества с адсорбентом, а также, соответственно, и скорость продвижения зоны вещества вдоль колонки.
Чем выше удерживание вещества, тем больше время удерживания его пика на хроматограмме.
    Фактор удерживания обозначается k' – это безразмерный параметр. Он определяется из хроматограммы как число отрезков по t0, которые надо отложить от t0 до максимума данного пика:
k' = (t'R-t0)/t0.
     Диапазон оптимальных удерживаний зависит от типоразмера колонки. Чем короче колонка, тем большее удерживание требуется для достижения оптимальных условий ее работы. В среднем этот диапазон соответствует 2 < k' < 10.


Хроматографическая система – chromatographic system, как правило, этим термином обозначают набор параметров, определяющих ее физико-химические свойства. К этим параметрам относятся: неподвижная фаза, подвижная фаза и температура.

Селективность – selectivity, в общем смысле: способность хроматографической системы разделять два вещества. Для конкретной пары пиков вычисляется как отношение факторов удерживания: α = k'1/k'2.
Нередко эту величину называют «относительным временем удерживания», что неверно. В хроматографии нет такого термина.


Эффективность – efficiency, термин с большим числом значений, в общем смысле: безразмерный параметр, характеризующий размывание зоны вещества в колонке. Обозначается N. Hередко эффективности приписывают формальную единицу “количество теоретических тарелок”, “т.т.”, “тыс. т.т.” и тому подобное, что лишено какого-либо физического смысла.
    Зона вещества может размываться как внутри колонки, так и вне ее (экстраколоночное размывание). Размывание внутри колонки определяется множеством факторов, в том числе качеством упаковки колонки при ее производстве.
   Эффективность колонки, измеренная таким образом, чтобы выявить качество ее упаковки, часто называют паспортной эффективностью. Сам процесс измерения называют тестированием колонки.
    Параметр “эффективность колонки” часто критикуют за его формализм, что чревато возможностью манипулирования им в коммерческих целях. На практике следует постоянно помнить, что разрешение пропорционально всего лишь квадратному корню эффективности, что, к тому же, выполняется лишь в области высоких удерживаний.


Пиковая плотность – peak capacity, термин, предложенный как альтернатива эффективности: число пиков, которые можно расставить на хроматограмме один за другим с разрешением 1 от удерживания,равного 0, до данного.
     Пиковая плотность пропорциональна квадратному корню эффективности и логарифму удерживания. Таким образом, высокая удельная пиковая плотность достижима только в области низких удерживаний. Однако, короткие колонки в данной области не успевают набрать паспортную эффективность. Соответственно, для достижения высокой пиковой плотности применяют длинные колонки.


Коэффициент асимметрии (на 1/10 высоты) – asymmetry factor, отношение правой полуширины пика к левой на 1/10 высоты пика. Коэффициент асимметрии (на 1/100 высоты) – tailing factor, отношение правой полуширины пика к левой на 1/100 высоты пика.

Разрешение – resolution, параметр, количественно выражающий степень разделения двух пиков. Вычисляется как отношение расстояния между их максимумами к сумме половин ширин на уровне базовой линии: R = 2*(tR2-tR1)/(w1+w2). При этом ширина пика определяется как длина отрезка, отсекаемого на базовой линии двумя касательными к пику, проведенными на половине его высоты.
    При R = 1 разделение двух пиков таково, что перекрываются около 2% их площади; при R = 1.2 перекрывание составляет всего порядка 0.3%.
Одной из основных формул хроматографии является зависимость разрешения от селективности, эффективности и удерживания: R = ¼ * (α-1)/α * √N * k'/(k'+1).
    Наиболее существенный недостаток параметра R состоит в том, что приведенный способ его расчета применим только к идеально симметричным пикам, что на практике является нечастым случаем. Для асимметричных пиков классический параметр разрешения дает завышенные результаты, поэтому не пригоден в качестве критерия разделения.
   Для асимметричных пиков методику определения ширины пика необходимо изменить: например, строить касательные не на половине высоты, а на 1/10 высоты пика для умеренно асимметричных, или на 1/100 высоты пика для сильно ассимметричных пиков. Тогда формула для расчета разрешения примет вид: R' = 2*(c2-c1)/(w1+w2), где w1, w2 – вычисленные по новому способу ширины пиков, а c2 и c1 – середины отрезков, отсекаемых касательными на базовой линии.


Критическая пара (пиков) – critical pair, два пика на хроматограмме с наименьшим разрешением; хотя бы один пик должен являеться пиком целевого соединения, что и обуславливает обязательность разделения критической пары.

Хроматографический режим – chromatographic mode, совокупность хроматографических систем, для которых селективность разделения для данной выборки соединений хорошо коррелирует с каким-либо физико-химическим свойством, измеренным или рассчитанным не из хроматографических данных.

Адсорбционные режимы – adsorption modes, хроматографические режимы, в которых динамическое разделение веществ обусловлено их адсорбционным удерживанием пористой неподвижной фазой (адсорбентом).
К адсорбционным режимам можно отнести: обращенно-фазовый (RP), нормально-фазовый (NP), ионный (IC, или IEC), с переносом заряда (CT), лигандообменный (LEX).
   Разделение в адсорбционном режиме начинается в нулевое время (время элюирования неудерживаемого компонента); максимальное время хроматографирования не ограничено.


Эксклюзионные режимы – exclusion modes, хроматографические режимы, в которых динамическое разделение веществ обусловлено их ограниченным проникновением в поры неподвижной фазы.
      К эксклюзионным режимам можно отнести: эксклюзионный по размеру (SEC, или GPC), а также ион-эксклюзионный (IEX).
В эксклюзионных режимах удерживание веществ неподвижной фазой отсутствует. Соответственно, взаимодействие вещества с НФ либо отсутствует (эксклюзионный режим по размеру), либо взаимодействие носит характер отталкивания (ион-эксклюзионный режим).
   Разделение в эксклюзионном режиме начинается в момент времени, соответствующий объему элюента между гранул НФ, а заканчивается в нулевое время (время элюирования неудерживаемого компонента, который проникает во все поры материала).


Вид хроматографии – совокупность хроматографических систем, для которых один из хроматографических режимов является доминирующим.

Смешанные (двойные, тройные) режимы – mixed modes, совокупность хроматографических систем, для которых нельзя выделить один доминирующий хроматографический режим.

Гибкость – flexibility, возможность варьировать селективность хроматографической системы в широком диапазоне путем изменения состава подвижной фазы и/или марки неподвижной фазы.
    Гибкие хроматографические системы удобны, в первую очередь, при разработке условий разделения, поскольку селективность разделения можно тонко настраивать (system fine tuning), принципиально не меняя технического решения.
     Гибкие хроматографические системы неудобны тем, что хуже воспроизводятся, т.е. валидируются (см. “Робастность”).
     При разработке методик, как правило, предпочитают начинать с опробирования негибких систем, и переходят к гибким только в том случае, если негибкие не способны обеспечить требуемой селективности разделения.
Наиболее гибкими являются системы, работающие в смешанных хроматографических режимах.


Валидация – validation, процедура проверки методики на соответствие заявленным характеристикам, которые называют валидационными.
   Объем исследований, проводимых в рамках валидации, зависит от конкретной ситуации. Наиболее широкие исследования проводятся при разработке методики.
    По упрощенной схеме проводится валидация аттестованной методики при ее внедрении в конкретной лаборатории. Подобные упрощенные схемы валидации могут быть приведены в самой методике в качестве рекомендаций разработчика.


Валидационные характеристики – validation characteristics, ряд декларируемых количественных показателей, характеризующих данную методику.
     Валидационные характеристики можно условно разделить на две группы. К первой группе относятся основные метрологические характеристики: рабочий диапазон, прецизионность, правильность, предел(ы) определения (обнаружения).
Ко второй группе относятся характеристики самого хроматографического определения: специфичность и робастность.
   В частных случаях валидироваться могут и другие специфические характеристики; к примеру, в фармацевтике валидация методики может включать тесты на растворимость.


Специфичность – specificity, возможность успешно провести определение по данной методике при наличии в пробе мешающих веществ (контаминантов): компонентов матрицы, примесей, продуктов деградации.Специфичность методики можно увеличить тремя способами. Первый способ состоит в выборе специфичного метода детектирования (который реагирует на целевые соединения, но не реагирует на вероятные контаминанты). Второй способ состоит в выборе специфичного режима разделения (в котором, к примеру, целевые соединения удерживаются, а вероятные контаминанты – нет). Третий способ состоит в применении двух или более дублирующих друг друга условий разделения с различающейся селективностью.
   Повышенные требования к специфичности предъявляются к анализаторам на базе жидкостных хроматографов. Наиболее специфичные методики принято рекомендовать как арбитражные.


Робастность – robustness, устойчивость хроматографической системы, ее способность демонстрировать неизменные удерживания и селективности при воспроизведении методики разделения в различных лабораториях или/и в различное время.
   В большинстве случаев робастность оценивают путем измерения хроматографических характеристик: удерживания, селективности – при небольшом варьировании параметров хроматографической системы. Проблема состоит в том, что в ряде случаев бывает нелегко выделить именно те параметры, которые критично влияют на робастность, или корректно измерить реальную степень оказываемого ими влияния.
   Например, для ион-парных обращенно-фазовых систем оценка робастности путем проведения серии экспериментов длительностью в нескольких часов будет некорректной, поскольку адсорбционное равновесие в таких системах устанавливается в течение нескольких дней.


Критерии пригодности хроматографической системыsuitability, набор критериев, по которому можно судить о том, что данное хроматографическое разделение воспроизведено корректно, и не может стать причиной возможного неуспешного прохождения процедуры валидации.
       Основным и, фактически, единственным необходимым критерием пригодности хроматографической системы является разшение критических пар на хроматограмме. Если критические пары разделяются выше некоторого заданного значения, то разделение является пригодным, и никакие другие критерии для подтверждения пригодности больше не требуются.
    Некоторая проблема применения разрешения R как критерия пригодности заключается в том, что “классический” расчет разрешения основан на предположении об идеальной симметрии пиков, т.е. для асимметричных пиков он не работает. Выход заключается в том, чтобы применять иную, более корректную методику расчета разрешения (см. “Разрешение”).
     Нередко в качестве критериев пригодности приводят такие характеристики как эффективность, удерживание, коэффициент асимметрии. В этом нет никакого смысла, поскольку корректно определенный параметр разрешения включает в себя все эти факторы.


Критерии пригодности хроматографической системыquantification, набор критериев, по которому можно судить о том, что относительная погрешность определения площади пика целевого соединения находится в заданных рамках.
      Для веществ, определяемых на уровне следовых концентраций, значительную погрешность при измерении площади пика может вносить шум. Для таких соединений принято задавать некоторое наименьшее значение отношения высоты пика к высоте шума, которое называется отношением сигнал/шум (signal-to-noise ratio), и обозначается S/N.
    Для основных веществ подобным критерием служит относительное среднеквадратическое отклонение, рассчитанное из серии измерений площади пика при вводе в хроматограф стандартного раствора определенной концентрации.

  Наши работы