ТИПОВАЯ ПРОГРАММА ВЭЖХ КУРСА
ДЛЯ ОТДЕЛОВ ИССЛЕДОВАНИЙ И РАЗРАБОТОК (3 дня)

​

* программа может быть изменена или дополнена по желанию Заказчика
** программа может быть дополнена практической частью по желанию Заказчика

 

​

День 1

 

1. Специфичность ВЭЖХ методики. Специфичность хроматографического разделения и специфичность детектирования.

2. Обзор способов детектирования в ВЭЖХ. Оптические, испарительные, электрохимические и масс-селективные детекторы, их специфичность и области применения. В каких случаях, и каким образом оптимизируют условия детектирования.

3. Классификация хроматографических методик согласно их назначению. Таргетные и нетаргетные методики. Изократический и градиентный способы элюирования.

4. Основные параметры ВЭЖХ разделения. Факторы, определяющие разрешение пары пиков.

5. Оптимальное удерживание. Оптимальная селективность. Оптимальная эффективность.

6. Общая последовательность разработки ВЭЖХ методик.

7. Базовые адсорбционные (RP, NP, HILIC, IC, CT, LEC) и эксклюзионные (SEC, IEX) режимы жидкостной хроматографии.

8. Смешанные режимы, часто применяющиеся при анализе фармацевтиков: RP/HILIC, RP/IC, RP/CT, RP/SEC, HILIC/IC, NP/CT.

 

9. Прогнозирование хроматографического поведения соединения в каждом из хроматографических режимов по его структурной химической формуле.

 

​

День 2

 

10. Обращенно-фазовый (RP) механизм удерживания. Регулирование удерживания в обращенно-фазовом режиме. Корректные способы регулирования селективности в обращенно-фазовом режиме. Преимущества и недостатки обращенно-фазовой хроматографии. Специфика обращенно-фазовых разделений с МС детектированием.

11. Нормально-фазовый (NP) и гидрофильный (HILIC) механизмы, их сходства и различия. Регулирование удерживания в нормально-фазовом режиме. Три эмпирических правила для регулирования селективности в нормально-фазовом режиме. Преимущества и недостатки нормально-фазовой хроматографии.

12. Ионный (IC) механизм удерживания. Регулирование удерживания в ионном режиме. Корректные способы регулирования селективности в ионном режиме. Преимущества и недостатки ионной хроматографии. Как разработать МС-совместимую методику в ионном режиме.

13. Регулирование удерживания в гидрофильном (HILIC) режиме. Корректные способы регулирования селективности в гидрофильном (HILIC) режиме. Правильное кондиционирование ВЭЖХ колонок в гидрофильном (HILIC) режиме; как разработать робастное гидрофильное разделение. Специфика гидрофильных разделений с МС детектированием.

 

14. Обзор коммерчески доступных неподвижных фаз для ВЭЖХ. Типы коммерчески доступных неподвижные фаз для обращенно-фазовой, гидрофильной (HILIC) и ионной хроматографии, обладающие различной селективностью.

15. Эволюция неподвижных фаз для ВЭЖХ. Основные производители неподвижных фаз для ВЭЖХ. Структура современного рынка ВЭЖХ колонок.  

16. Современные тренды в разработке неподвижных фаз для ВЭЖХ. Неподвижные фазы для работы в смешанных режимах. Поверхностно-пористые неподвижные фазы, их преимущества и недостатки.

​

​

День 3

​

17. Тестирование ВЭЖХ колонок. Измерение их эффективности, химической инертности, величины удерживания по доминирующему механизму и типа проявляемой селективности. Тесты для обращенно-фазовых и гидрофильных/ионных неподвижных фаз.

18. Подбор ВЭЖХ колонки, «аналогичной данной».

 

19. Теория скоростей и уравнение Ван-Деемтера. Гидродинамика ВЭЖХ колонки и закон Дарси.

20. Эффективность, производительность, запас по давлению и импеданс колонки как ресурсы ВЭЖХ разделения на этапе его оптимизации; общий вид взаимосвязи этих параметров.

21. Общая схема выбора оптимальной скорости потока. Эффективность-оптимальная, средневзвешенная и производительность-оптимальная скорости потока.

22. Общая схема выбора оптимальной длины колонки и размера частиц.

 

23. Неколоночные факторы уширения пика.  Экстраколоночные объемы. Перегрузка количеством вещества; нагружаемость колонки в различных ВЭЖХ режимах. Перегрузка объемом пробы; оптимальные и неоптимальные растворители пробы.

24. Химические причины уширения пика и способы их устранения. Химическая инертность неподвижных фаз.

25. Пиковая плотность, ее связь с эффективностью и фактором удерживания. Влияние нагружаемости колонки на реальную пиковую плотность.

26. Оптимизация ВЭЖХ разделения с учетом влияния неколоночных факторов уширения пика. Оптимальные типоразмеры ВЭЖХ колонок для рутинных ВЭЖХ разделений при различных значениях предельного давления.

 

27. Основные факторы, определяющие экономическую эффективность ВЭЖХ решения. Отличительные черты устаревших неэффективных ВЭЖХ методик. Отличительные черты современных, высокотехнологичных и экономически эффективных ВЭЖХ решений.

​

День 4,5: опционально

Практикум: разработка и оптимизация ВЭЖХ методик

​

​

​

ОПЦИОНАЛЬНЫЕ МОДУЛИ ВЭЖХ КУРСА

ДЛЯ ОТДЕЛОВ ИССЛЕДОВАНИЙ И РАЗРАБОТОК

 

 

1. Экономическая эффективность ВЭЖХ лаборатории

Аналитическая лаборатория как звено производственной цепочки. Применение теории ограничений к управлению аналитической лабораторией. Практические подходы по увеличению экономической эффективности деятельности лабораторий. Аналитическая лаборатория как центр прибыли.

 

2. Управление смешанными ВЭЖХ режимами

Техника работы со смешанными режимами. Переключение режимов путем варьирования состава подвижной фазы. Особенности работы со смешанными режимами со вкладом обращенно-фазового механизма.

​

3. Ион-парные режимы

3.1. Динамическое модифицирование в ВЭЖХ. Ион-парные режимы. Ион-парная обращенно-фазовая хроматография, ее преимущества и недостатки. Способы коррекции удерживания и селективности в ион-парном режиме.

3.2. Проблемы трансфера методик в ион-парном режиме, способы их устраниения (минимизации). Правильное кондиционирование неподвижных фаз при работе в ион-парном режиме. Типичные ошибки при работе с ион-парными разделениями.

​

4. Твердофазная экстракция (ТФЭ)

4.1. ТФЭ как предельный вариант жидкостной хроматографии. Разница ТФЭ и адсорбционной очистки. Основные термины ТФЭ: кривая проскока, кривая смыва, емкость адсорбента. Офф-лайн и он-лайн ТФЭ.

4.2. Техника работы с ТФЭ.

4.3. Основные типы адсорбционных материалов для ТФЭ.

4.4. Три основные задачи прободготовки для ТФЭ. Выбор тактики при разработке ТФЭ методик. Правильное сочетание режима для проведения ТФЭ и аналитического метода для конечного определения (ГХ, ОФ ВЭЖХ, НФ ВЭЖХ и т.д.).

4.5. Двумерная «heart-cut» хроматография как предельный случай он-лайн ТФЭ. On-column и off-column концентрирование пробы между двумя колонками в «heart-cut» ВЭЖХ.

​

5. Хиральная ВЭЖХ

5.1. Обзор коммерчески доступных неподвижных фаз для хиральной ВЭЖХ.

5.2. Основные закономерности хирального разделения. Способы регулирования селективности хирального разделения.

​

6. Основы трансфера ВЭЖХ методик

6.1. Обеспечение прослеживаемости ВЭЖХ измерения. Основы квалификации ВЭЖХ оборудования. Типовые тесты основных узлов ВЭЖХ комплекса. Квалификация протокола обработки данных. Тестирование ВЭЖХ колонок.

6.2. Основы валидации ВЭЖХ методик. Валидационные характеристики. Различные способы установления специфичности определения. Особенности валидации робастности. Протокол валидации робастности. Критерии пригодности хроматографического разделения.

6.3. Основные типичные проблемы при трансфере ВЭЖХ методик и способы их минимизации.​

​